Biotin Tyramide（YF®/Biotin 酪胺） 产品说明书
Biotin Tyramide（YF®/Biotin 酪胺）
产品规格：10 μL，100 μL
产品货号：XK0072S
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
酪胺信号放大技术（Tyramide Signal Amplification）又
称催化信号放大技术（Catalyzed Signal Amplification），是
一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方
法，其不但可以用于IF/IHC的信号放大，亦可用于Elisa、 ISH
等检测。
酪胺信号放大技术可以用于检测用传统方法无法检出
的低丰度靶标。基于酪胺的信号放大技术能够提供极强的灵
敏度、检测极微量的目的抗原。酪胺信号放大技术极大的降
低抗体的用量，节约抗体。酪胺信号放大试剂盒可与传统染
色方法结合使用以多色成像，也可以顺序进行两个或更多个
酪胺反应以标记一个样品上的不同靶标。

使用方法
1. 自备试剂：
（1）1×  PBS
（2）多聚甲醛固定剂（4%多聚甲醛  in PBS）
（3）促渗试剂  (0.5% Triton X - 100 in PBS)
（4）0.1 M柠檬酸钠缓冲液  (pH 6.0)
（5）一抗，二抗
（6）Tyramide Amplification Buffer（含过氧化氢）
（7）30%过氧化氢
（8）封闭缓冲液：可将1 g BSA溶于100 mL含0.5% Triton X
- 100的PBS中配置成封闭缓冲液，也可选择市面上在售封闭
缓冲液。
2. 下列组分仅用于Biotin-Tyramide试剂盒中：
（1）生物素封闭清洗缓冲液：含1% BSA和0.05% Tween 20
的PBS。
（2）未标记的链霉亲和素溶液：含0.1 mg/mL链霉亲和素的
生物素封闭清洗缓冲液。
（3）生物素溶液：含 0.5 mg/mL生物素的生物素封闭清洗
缓冲液。
以下参考步骤，可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色，
每个样品使用100 μL染色液 （足以覆盖96孔板的一个孔或约
1  cm2的组织部分）。可根据不同的样本尺寸增大或缩小体
积。
3. 样本准备
（1）细胞样品
a.  可选：准备一份阴性对照样本（不孵育一抗的样本）。
b. 1× PBS 清洗细胞两次。
c.  细胞固定：加入适量 4%  多聚甲醛（pH 7.4）溶液，4 ℃
放置 15 min。
d. 1× PBS 清洗细胞两次。
e.  通透细胞：用配制于PBS 中的 0.5% Triton X - 100 溶液通
透，室温放置 10 min。或者加入冰上预冷的 70%乙醇，在
-20℃孵育 4 h。细胞能在 70%乙醇中-20℃的条件下保存一
周。
f. 1× PBS 清洗细胞两次。
（2）石蜡组织切片
a.  将石蜡切片放置在 60℃的烘箱中 30 min。
b.  室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2 次，每次5 min，以
脱掉石蜡。
注：二甲苯有毒，易挥发，请在通风橱中进行此操作。
c.  室温下，将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗 2 次，每次5
min。
d.  室温下，将切片样本连续浸没在不同浓度梯度的乙醇
（95%、90%、80%、70%）中，每种浓度各漂洗 1 次，每
次 5 min。
e.  室温下，将切片浸没于纯水中漂洗 1 次，每次3 min，再
将切片浸没于 1×   PBS 中漂洗1 次，每次 3 min，用滤纸小
心吸干切片样本周围多余液体。
f.  用免疫组化笔在切片样本周围描绘样品轮廓，以便下游通
透与标记。
g.  抗原修复：将 0.1 M 柠檬酸盐缓冲液（PH = 6.0），用微
波炉加热至沸腾，将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中
间，断煮沸 10 min。注意此过程中，玻片上组织要一直浸没
于缓冲液中，以保证组织的抗原修复效果。抗原修复持续时
间过后，取出放于室温中让其慢慢地降温。
注：需根据不同的样本选择不同的抗原修复方法。
h. 1× PBS 清洗两次。
4.（可选）内源性过氧化物酶灭活
如果需要， 可加入足够量的 3% Hydrogen Peroxide 覆盖
样品并在室温下孵育 60 min， 淬灭样品的内源性过氧化物酶
活性。
5.（可选）内源性生物素阻断
进行链霉亲和素/生物素检测时，我们建议阻断样品中
的内源性生物素以减少背景。对于标记 YF®染料的酪酰胺和
HRP 二抗的试剂盒来说，可省略此步骤。
（1）在室温下，将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵
育 15 min，然后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下
洗涤 3 次，每次5 min。
（2）在室温下将样品与生物素溶液孵育 30 min，以封闭链
霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清洗
缓冲液洗涤样品 3 次，每次5 min。
6. 免疫标记
（1）封闭：用封闭缓冲液室温封闭 1 h。市面在售封闭缓冲
液一般封闭 10 min 即可。
（2）用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一
抗在室温下孵育 1 h 或 4℃过夜。
注：如果使用含有 HRP  –  Streptavidin 的试剂盒，请使用生
物素偶联的一抗。
（3）室温下 1×PBS 洗涤3 次，每次 5 min。
（4）在封闭缓冲液中将 HRP - conjugated 以1 : 200 稀释。
用该溶液在室温下孵育上述样品 1 h。
（5）室温下 1×PBS 洗涤3 次，每次 5 min。
（6）用 1×Tyramide Amplification Buffer 以 1  :  200 稀释
Tyramide Stock Solution，200×  来制备染色液。每个样品准
备 100 μL染色液。染色液在室温下避光保存，最长可保存
24 h。
（7）将样品与染色液在室温下孵育 10 min。
（8）在室温下用 1×  PBS 洗涤3 次，每次 5 min。
（9）可选：如果使用 Biotin-酪酰胺试剂盒，可使用荧光标
记的链霉亲和素进行荧光显色，也可使用含 HRP 的链霉亲
和素标记，后使用 DAB 显色。
（10）显微镜成像。对于载玻片上的组织样本，请盖上盖玻
片并密封后，再显微镜成像。
注意事项
1. 与荧光二抗相比，TSA 试剂盒显示出更高的灵敏度和更
强的信号。因此，实验时一抗的使用浓度较低，这样可以降
低非特异性结合带来的背景荧光，我们建议梯度设置一抗浓
度以找到 浓度。
2. 如果需要考虑背景荧光，建议设置未与一抗孵育的阴性对
照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中
的试剂交叉污染。对于组织样品，我们还建议对未染色的对
照（不添加抗体或酪酰胺）进行成像，以确定组织自发荧光
对背景的影响。
3. 建议使用 5  μg/mL的 HRP 结合物，降低浓度可能会影响
信号强度和灵敏度。
4. 建议 1 : 200 稀释 YF®/Biotin - Tyramide。较高的浓度可能
会导致信号过强或背景高，可以从 1 : 100 到1 : 1000 摸索以
找到 浓度。
5. 可以在每个酪酰胺反应后通过进行 HRP 淬灭或抗体剥
离，依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不
同靶标。
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本产品仅用于科研

Biotin Tyramide（YF®/Biotin 酪胺）