羊小反刍兽疫病毒抗体ELISA检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

【产品名称】

通用名：羊小反刍兽疫病毒抗体ELISA检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）

【包装规格】

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一种急性接触性传染病，其特征为口腔、舌粘膜糜烂、流泪、流鼻液。本病的易感动物为山羊，也可感染绵羊、白尾鹿等，但对牛无感染性。

本试剂用于检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体，可用于小反刍兽疫疫苗免疫效果评价。

【原    理】

本试剂盒由预包被小反刍兽疫病毒重组抗原的酶标板、抗体工作液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用竞争酶联免疫法（ELISA）原理检测羊血清、血浆样本中小反刍兽疫病毒抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液，经温育后洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，若样品中含有小反刍病毒抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有小反刍兽疫病毒抗体。

【储存及有效期】

2～8℃保存，有效期12个月。包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】

含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.待检血清样本恢复室温、混匀待用。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl；样品孔每孔先加入40μl工作洗涤液,再加入10μl血清样本（稀释比例为1:5）。

4.每孔加抗体工作液50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350 ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，*一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】

实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥1.0，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。

【检验结果的解释】

1.PI（阻断率）=（1-样本值/阴性对照孔均值）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。

2.本实验结果为阴性表明羊只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体，根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。