SuperView™488 Caspase-3底物 产品说明书
SuperView™488 Caspase-3底物
产品货号：XK1005
S1006：XK1005
产品规格：100 μL
储存条件
-20℃避光干燥保存，有效期见外包装。
光谱特性
SuperView™ 488：Ex/Em = 500/530 nm (with DNA)
产品介绍
SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 基于caspase-3/7
活力检测细胞凋亡提供了有效的工具， 适用于荧光显微术和
流式细胞术。
相比其他基于（FLICA）分析的 caspase 的荧光底物或
荧光抑制剂，SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 检测
caspase-3/7 活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。
Substrate 由耦合caspase-3/7 DEVD识别序列的荧光
DNA染料组成。Substrate 最初无荧光，穿过细胞膜进入细
胞质。在凋亡细胞中，caspase-3/7剪切Substrate，释放高亲
和性的DNA染色，这种染料迁移到细胞核标记DNA并发出
明亮的绿色荧光。 因此， SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate
是双功能的，既可以检测caspase-3/7活性，又可视化细胞核
在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView™ 488染色可
以甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。
SuperView™ 488 Caspase-3 Substrate 提供 DMSO 和
PBS 两种溶解形式。PBS 形式可用于对 DMSO毒性敏感的
细胞，在对 DMSO不敏感的细胞类型中，添加 DMSO 溶解
形式可增强、SuperView™ 488的孵育染色效果。
使用方法
1. 实验优化
下 面 提 供 的 实 验 步 骤 根 据 终 点 法 检 测 制 度 。
SuperView™ 488 Substrate也可以进行细胞长时间孵育研究
（详见后“常见问题”）。细胞密度、底物浓度和抑制剂浓
度可能需要优化。 底物浓度可能在1-10 μM之间。细胞
可以在培养基、PBS或其他您所选择的缓冲液中孵育底物。
对于贴壁细胞，我们建议更换新鲜含有底物的培养基，以防
背景的不均一性。 底物孵育后换液或洗涤细胞的操作是自由
选择的。当在DMSO不敏感的细胞类型中使用S1006时，添
加DMSO可能会加强SuperView™ 488染色效果。

2. 对照
我们建议您设定以下对照：
A. 阴性对照：不诱导凋亡的细胞
B. 阳性对照：诱导凋亡的细胞
3. 流式细胞术
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。
（2）贴壁细胞， 进行SuperView™ 488 Caspase-3实验前先用
胰蛋白酶或其他方法消化细胞。
（3）用培养基或缓冲液重悬细胞，使细胞密度为106
/mL。
（4）吸取0.2 mL细胞悬液至流式细胞试管。
（5）往200 μL细胞悬液中加入1 μL 1 mM的Substrate 并立
即混匀使底物浓度为5 μM。不同细胞的 底物浓度可能
不同，需分析优化。
（6）室温避光孵育细胞15-30 min。
（7）加入300 μL培养基或PBS，流式细胞仪分析。检测绿
色荧光的通道（激发/发射：485/515 nm）。
4. 荧光显微镜
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。
（2） 用含有5 μM Substrate 的新鲜培养基或PBS对细胞进行
换液（见试验优化）。
（3）室温下孵育细胞30 min或更长时间。
（4）细胞可以在含有Substrate的培养基中直接观察。对于
终点分析法，PBS清洗细胞，荧光显微镜观察细胞，使用观
察绿色荧光的滤片（激发/发射：485/515 nm）。
5. 荧光酶标仪
（1）贴壁细胞在黑色96孔板中进行培养；悬浮细胞，调整
密度至106
cells/mL，0.2 mL细胞悬液分装到一孔。
（2）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。注意：细胞可以在管或瓶中处理，然后转移到96
孔检测板。
（3）对于悬浮细胞，直接添加Substrate混匀。对于贴壁细
胞， 用含有5 μM Substrate的新鲜培养基或PBS对细胞进行换
液（见试验优化）。
（4）室温避光孵育细胞15-30 min。
（5）对于悬浮细胞，轻轻摇晃重悬细胞。荧光酶标仪设置
激发波长488 nm和发射波长520 nm。 建议贴壁细胞使用底部
采集方式。贴壁细胞密度的变化可能导致不准确的读数。
注意事项
1. 细胞可以用终浓度为1 μM的Hoechst 33342染料共同染
色，使细胞核产生蓝色荧光染色（激发/发射：346/460 nm）。
2. SuperView™ 488染色可以被甲醛固定，但与甲醇固定不
兼容。
3. 甲醛固定的 SuperView™ 488 染色细胞可以用 0.1%
Triton X-100处理后进行后续染色，但这样处理后的染色的
亮度可能会减弱。
常见问题
问题 回答
稳定性如何？ 该物质稳定性很好，用户反馈该产品37℃放置4-5天，效果仍然很好
何时加入细胞中？ 该物质实验前期、后期加入细胞均可，它不影响细胞凋亡进程，可实时监测caspase-3活性。
可用于组织染色吗？ 本公司未进行活组织染色实验，有文献报道可用于胚胎组织或三维培养细胞。
可用于随后的免疫染色吗？ 可以。推荐使用2-4%的多聚甲醛室温固定10-15 min，固定时间过长会导致信号下降。
特异性如何？
与其它caspase-3底物相似，SuperView™ Caspase-3 Substrate 是基于能被Caspase-7切割的DEVD
caspase-3 共同序列，其它的半胱天冬酶也可能因与底物特异性序列重叠而切割DEVD 底物。
适用于哪些细胞？ SuperView™ Caspase-3 Substrate 已被报道用于多种原代细胞和科研文献中的永生化细胞中
本产品仅用于科研

SuperView™488 Caspase-3底物