5(6)-CFDA, SE（5(6)-羧基荧光素二乙酸，琥珀酰亚-胺酯） 产品说明书 
5(6)-CFDA, SE（5(6)-羧基荧光素二乙酸，琥珀酰亚-胺酯） 
产品货号：XK4070
产品规格：5 mg 
应用范围：细胞成像、细胞增殖和功能、细胞示踪、细胞计数 
 产品参数 
外观：可溶于 DMSO 的白色或浅黄色固体 
CAS 号：150347-59-4 
Ex/Em：494/521 nm（pH=7） 
分子式：C29H19NO11 
分子量：557.47 
细胞标记机制： 
 
 储存条件 
-20℃避光保存，有效期见外包装。 
 产品介绍 
5(6)-CFDA, SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞
示踪染料，不仅可用于细胞增殖的体外实验，还可用于追踪
细胞在体内的分裂增殖过程。 
5(6)-CFDA, SE 是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，
FDA）的衍生物，具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光
性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，被胞浆内的
酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein 
succinimidyl ester，CFSE），可发强烈的绿色荧光，不能穿
透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE 还可自发并不可逆
地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量
且未被偶联的5(6)-CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养
基内，被后续清洗步骤所清除。经 5(6)-CFDA, SE 标记的非
分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此
非常适用于细胞群落分析。 
5(6)-CFDA, SE 标记细胞的荧光非常均一，优于以前使
用的其他细胞示踪荧光探针如 PKH 26，并且分裂后的子代
细胞的荧光分配也很均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 
标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代
细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1 通道）根据荧光强度的
不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2 的荧光强度），
二次（1/4 的荧光强度），三次（1/8 的荧光强度），以及更
多分裂次数的细胞。5(6)-CFDA, SE 可检测分裂次数多达八
次甚至更多。经 5(6)-CFDA, SE 标记的细胞可用于体外和体
内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。5(6)-
CFDA, SE 最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维
细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。  
5(6)-CFDA, SE 标记细胞呈绿色荧光，除了流式细胞仪
检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者
用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。 
 使用方法（针对活细胞染色的推荐步骤，可根据实际情
况进行适当调整） 
注：5(6)-CFDA, SE 与胺基反应，所以实验过程中不可使用
含胺的缓冲液。 
 1.  开盖前使其恢复至室温，然后用 DMSO 制备 10 mM 的 
5(6)-CFDA, SE 储液。用PBS 或适当的缓冲液稀释成 0.5~25 
μM的5(6)-CFDA, SE工作液（稀释后的工作液要及时使用）。
注：若进行较长时间的染色或细胞分裂较快，建议工作浓度
为 5-10 μM，否则建议工作浓度为 0.5-5 μM。最适工作浓度
因细胞不同而异，建议在一个范围内进行摸索。 
2.  离心收集细胞，用 37℃预热的 5(6)-CFDA, SE 工作液重
悬细胞。 
3.  在37℃培养细胞 15~30 min。 
4.  用 PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞两次，用流式细胞仪
（FL1/BL1 通道）或荧光显微镜观察细胞。 
以下为可选步骤（若后续需要进行抗体标记，可进行固定和
透化）： 
5.  固定。可使用3.7%的多聚甲醛室温固定 15 min。 
6.  透化。冰丙酮中透化 10 min。固定和透化后，细胞需要
用PBS 清洗。 
 注意事项 
1. 5(6)-CFDA, SE 与胺基反应，所以实验过程中不可使用含
胺的缓冲液。 
2.  荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光
淬灭。 
3.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研 
5(6)-CFDA, SE（5(6)-羧基荧光素二乙酸，琥珀酰亚胺酯）