Hoechst 33258 染色液（即用型）产 品 说 明 书
Hoechst 33258 染色液（即用型）
产品货号：XK4078
产品规格：10 mL
应用范围：核酸染色
产品参数
Ex/Em（结合 DNA）= 352/461 nm
Ex/Em（未结合 DNA）= 346/460 nm
CAS 号：23491-45-4
分子式：C25H24N6O ? 3HCl
分子量：533.88
分子结构图：
储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
Hoechst 33258，也称 bis Benzimide H 33258 或 HOE
33258，是一种非嵌入性的亮蓝色荧光染料。染料在溶液中
荧光较弱，但在 AT序列富集区域的小沟处与 DNA 结合后
荧光变得明亮，故此类染料也被称为 DNA 探针。因背景较
低，故染色细胞不需洗涤步骤，且染色非常稳定，对活细胞
无毒，结合 DNA 染色后可持续几天或更长时间。Hoechst
33258 与 Hoechst 33342 相比在水中的溶解度要高，但两种
染料均具有高细胞膜渗透性，被广泛用于细胞凋亡检测，染
色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

实验步骤
1. 对于固定的细胞或组织
（1）对于细胞或组织样品，固定后适当洗涤去除固定剂。
如需免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再
按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。
（2）对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258
工作液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待测染
色样品体积 3倍的染色液，混匀。室温放置 3-5 min。
（3）吸除 Hoechst 33258染色液，用 TBST、PBS或生理盐
水洗涤 2-3次，每次 3-5 min。
注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。
（4） 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或
呈碎块状致密浓染。
2. 对于活细胞或组织
（1）加入适量 Hoechst 33258 工作液，充分覆盖待染色的
样品，通常对于六孔板每孔需加入 1 mL 的染色液，对于 96
孔板每孔需加入 100 μL 的染色液。
（2）室温避光孵育10-20 min。
（3）弃染色液，用PBS洗涤 2-3次即可进行荧光检测。
注：清洗步骤可选但不是必须的，清洗后不影响染色。
注意事项
1. Hoechst染料通常用于染色哺乳动物细胞，但是也可以用
来染色死活细菌，染色死活细菌时推荐在 PBS 或 150 mM
的NaCl中溶解为终浓度12-15 μg/mL 的染色液室温染色30
min。对酵母的染色较弱。通常对于死细胞的染色要比活细
胞染色亮度高。
2. Hoechst 33258染料溶于水时溶解度可达 10 mg/mL， 用于
细胞核染色时，推荐的 Hoechst 33258 工作浓度为 0.5-10
μg/ml，客户可根据实际染色情况对染色液浓度及染色时间
上下摸索。
3. 如需调整使用浓度，请选择 H4046，自行配置合适的工
作液浓度。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成
检测。
本产品仅用于科研

Hoechst 33258 染色液（即用型）