DiO Plus（细胞膜绿色荧光探针升级款）产品说明书
DiO Plus（细胞膜绿色荧光探针升级款）
产品货号：XK4021
产品规格：5 mg
应用范围：细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪
产品参数
外观：可溶于乙醇、己烷、DMSO 或植物油的橙黄色固体
Ex/Em(MeOH)：484/501 nm
分子式：C16H17Cl2N5
分子量：1086
分子结构图：
储存条件
4℃避光保存，有效期见外包装。
产品介绍
DiO Plus效能等同于 Neuro-DiO。
DiO Plus是一种代替膜绿色荧光染料DiO的新型染料，
DiO 由于其溶解度低、 易形成聚合物和横向扩散速度缓慢等
缺点，很难用于神经元和细胞悬液的研究。DiO Plus和 DiO
具有几乎相同的吸收光谱和发射光谱， 但前者具有更好的膜
溶解性，并且不形成非荧光性的聚集体，通常这也会减慢染
料在膜上的扩散速率。
DiO Plus染色后可进行多聚甲醛 （不可使用甲醇等其他
试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，
在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以
很好地进行质膜染色。

使用方法
1. 染色液制备
（1） 配置DMSO或EtOH储存液： 储存液用DMSO或EtOH
配置浓度 1~5 mM。
注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，
HBSS或 PBS）稀释储存液，配制浓度为 1~5 μM 的工作液。
注： 工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化
建议从推荐浓度的 10倍范围内开始 浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为
1×106
/mL。
（2） 37℃孵育细胞 20 min， 不同的细胞 培养时间不同。
可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一
的标记结果。
（3）孵育结束，1000~1500 rpm离心 5 min。倾倒上清液，
再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（4）重复步骤（3）两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但表面要
保持湿润。
（3）在盖玻片的一角加入 100 μL的染料工作液，轻轻晃动
使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞 培养时间不
同。 可以 20 min作为 起始孵育时间，之后
优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3次，每次用
预温的培养基覆盖所有细胞， 孵育 5~10 min， 然后吸干培养
基。但要使表面保持湿润。
4. 结果检测
样品可在培养基中进行检测， 可以通过荧光显微镜成像
或流式细胞仪分析。
注意事项
1. DiO Plus染色固定的细胞或组织样品时， 样品宜使用配制
在 PBS中的 4%多聚甲醛进行固定， 使用其它不适当的固定
液会导致荧光背景较高。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧
光淬灭。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研

DiO Plus（细胞膜绿色荧光探针升级款）