细菌活力/毒性检测试剂盒 产  品  说  明  书  
细菌活力/毒性检测试剂盒 
产品货号：XK6060S
产品规格：20T, 100T 
产品内容： 
组分  L6060S (20T)  L6060L (100T) 
A. NucGreen  20 μL  100 μL 
B. EthD-III  40 μL  200 μL 
 
储存条件 
-20℃  避光保存，有效期见外包装。 
 
光谱特性 
NucGreen: Ex/Em: 503/530 nm (with DNA) 
EthD-III: Ex/Em: 530/620 nm (with DNA) 
 
产品介绍 
细菌活力/毒性检测试剂盒包含两种荧光染料，
NucGreen  是绿色核酸染料，可染色活细菌和死细菌；
EthD-III  是红色核酸染料，仅染色细胞膜受损的死细菌。将 
NucGreen  和  EthD-III  适当混用，具有完整细胞膜的细菌呈
现绿色，而具有受损细胞膜的细菌在不同通道下可分别呈现
绿色和红色。 
细菌活力的常见标准是在合适的营养培养基中繁殖的
能力，称为生长测定。本试剂盒通常与在液体或固体培养基
中的生长测定结果有着很好的一致性。然而，在某些条件下，
膜损伤的细菌可能会在营养培养基中恢复并繁殖，而这种细
菌在本测定中会被认定死菌。相反，一些具有完整膜的细菌
可能无法在营养培养基中繁殖，但在本测定中会被认认定活
菌。因此，若本试剂盒检测结果和细菌生长测定之间有较大
的差异，应考虑上述可能。 
实验方法 
以下实验方案以  Escherichia coli  为例： 
1.  在合适的液体培养基中培养细菌至对数生长晚期。 
2.  向  EP  管中加入  1 mL  的菌液，5,000 ×g  离心 15 min。  
3.  去除上清液，加入  1 mL  的 0.85% NaCl  溶液重悬细菌。  
4. 5,000 ×g  离心  15 min，去除上清，加入  1 mL的 0.85% 
NaCl  溶液重悬细菌。重复一次。 
5.  将菌悬液密度调整到  108 
个细菌/ mL（OD670 
≈ 0.03）。 
6.  配制染色工作液：取  1 μL  的 NucGreen  和  2 μL  的 
EthD-III，充分混匀后，加入  8 μL  的 0.85% NaCl  溶液。 
7.  取  1 mL  菌悬液，加  10 μL  的染色工作液。充分混合，
室温避光孵育  15 min。 
8.  染色结束后，取  10 μL  菌悬液滴加在带有  18 mm  方形
盖玻片的载玻片上，尽快拍照，避免干片。 
9.  荧光显微镜成像。绿色荧光可使用  FITC  适用滤光片观
察，红色荧光可使用  PI  适用滤光片观察。 
 
注意事项 
1.  若使用孔板检测，可静置  10 min  后留少量菌液成像，能
有效降低背景。 
2.  为更接近真实结果，Merge  图片时建议保持红色荧光与

绿色荧光亮度一致。

本产品仅用于科研       

细菌活力/毒性检测试剂盒