JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒产 品 说 明 书
JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒
产品货号：XK6004S
产品规格：20T, 100T
产品内容：
组分 J6004S (20T) J6004L (100T)
A: JC-1, 100× in DMSO 100 μL 500 μL
B: 10× Assay Bu?er 2 × 1 mL 10 mL
C: CCCP, 50 mM 10 μL 50 μL
储存条件
4℃避光冷藏，并尽量避免反复冻融。有效期见外包装。
光谱特性
Ex/Em：510/527 nm （单体物，绿色）；
585/590 nm （聚合物，红色）
产品介绍
线粒体膜电位降低是细胞早期凋亡的一个标志， 它发生
在细胞膜上的磷酯酰丝氨酸外翻与 Caspase 水解酶激活之
前。当线粒体膜通透性发生改变时，膜电位会降低。这种膜
电位的改变是由于 Bax 二聚体的形成和 Bid, Bak, Bad 的激
活，从而诱导线粒体膜形成孔隙造成的。当这些促凋亡蛋白
被激活时，线粒体同时也将细胞色素 C 释放到细胞质中。
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△ Ψm 的理想
荧光探针，它可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形
成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1
不能聚集在线粒体的基质中，此时 JC-1 为单体，可以产生
绿色荧光。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很
容易地检测到膜电位的下降，同时也可以用 JC-1 从红色荧
光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1 单体的 激发波长为 510 nm， 发射波长为
527 nm；JC-1 聚合物的 激发波长为585 nm， 发射
波长为 590 nm。这款试剂盒操作简单快速，可以通过流式
细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪检测。
使用方法
1. 试剂准备
配制 JC-1 工作液
按如下方案配置 1 mL 1×JC-1 染色工作液：取 10 μL
100×JC-1染色液，加入到 890 μL 灭菌的 diH2O 中，涡旋混
匀，向上述混合液中加入 100 μL 10× Assay Buffer，涡旋混
匀，即可得到 1×JC-1 染色液。
注：①配置体积可同比例扩大或缩小。
②不建议直接用1×Assay Buffer稀释100×JC-1染色液，
可能会出现沉淀。
配制 1× Assay Buffer
用 diH2O 按10： 1稀释检测缓冲液， 如 1 mL 10×assay buffer
+ 9 mL diH2O
2. 流式细胞染色方案
细胞染色
开始实验之前，请确保 JC-1和 CCCP溶液已恢复至室温。
（1）按实验所需，在培养板中接种细胞（悬浮细胞不要超过 106
个/mL）。
（2）阳性对照组：根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
CCCP 溶液 （如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
mM 的 CCCP溶液），37℃孵育 20 min。对于特定的细胞，
CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相
关文献资料确定。
（3）对于贴壁细胞，染色前先进行消化处理，将其制成细
胞悬液，0.5 mL装于离心管中。
（4）室温下 400 × g，离心 5 min。
（5）除去上清。
（6）用 0.5 mL 的JC-1 工作液重悬细胞。
（7）置于 37℃细胞培养箱，孵育 15 min。
（8）室温下 400 × g，离心 5 min，去除上清。
（9）用 2 mL 的 PBS 缓冲液、培养基或 1× Assay Buffer 重
悬细胞，离心去除上清，重复一次。
（10）用 0.5 mL 的 PBS、培养基或 1× Assay Buffer 重悬细
胞，用流式细胞仪检测分析。
流式细胞仪定量分析
对于正常细胞，在 PE 或 PI（FL2）通道可以检测到线
粒体内的 JC-1 红色聚集物；对于凋亡细胞，在 FITC（FL1）
通道可以检测到 JC-1 绿色单体物。
3. 荧光显微镜染色方案
悬浮细胞染色
（1）参照流式细胞仪染色方案，对细胞进行染色。
（2）用 0.3 mL 的PBS 或培养基重悬细胞。
贴壁细胞染色
（1）在培养皿或培养板上接种细胞。
（2）阳性对照组：根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
CCCP 溶液 （如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
mM 的 CCCP溶液），37℃孵育 20 min。对于特定的细胞，
CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相
关文献资料确定。
（3）去除培养基，加入JC-1 工作液使其覆盖细胞表面。
（4）置于37℃细胞培养箱，孵育 15 min。
（5）除去染液，用PBS 缓冲液、培养基或1× Assay Buffer
清洗一次细胞。
（6）用荧光显微镜观察分析。
荧光显微镜成像
采用可以同时检测荧光素和罗丹明，或者荧光素与
Texas Red 的双通道滤波器荧光显微镜观察细胞。对于正常
细胞，拥有完整的线粒体膜电位，线粒体在 590 nm处发出
红色荧光，细胞质发出绿色荧光；对于凋亡或坏死的细胞，
染料以单体形式存在，在 530 nm处发出绿色荧光。
4. 测定荧光相对比率染色方案
（1）按照实验要求在96孔板中接种细胞。
（2）阳性对照组：根据培养基的量加入相应体积 50 mM 的
CCCP 溶液 （如终浓度为 50 μM即 1 mL 培养基加入 1 μL 50
mM 的 CCCP溶液），37℃孵育 20 min。对于特定的细胞，
CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相
关文献资料确定。
（3）根据荧光显微镜细胞染色方案对细胞进行染色处理。
（4）用荧光酶标仪检测荧光值（红色荧光：Ex/Em=550/600
nm；绿色荧光 Ex/Em=485/535 nm）。
（5）计算红绿荧光比值。
（6）与正常细胞相比，在凋亡或坏死细胞中，红绿荧光比
值会降低。

本产品仅用于科研

JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒