SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒产品说明书
SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒
产品货号：XK6007S
产品规格：25T, 100T
产品内容：
组分 S6007S(25T) S6007L(100T)
A. SuperView 488 Caspase-3 Substrate, 0.2 mM in DMSO 125 μL 500 μL
B. Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM in DMSO 20 μL 100 μL
储存条件
储存于 4oC，其中A 组分需避光，有效期见外包装。
光谱特性
SuperView 488：Abs/Em = 500/530 nm (with DNA)
产品介绍
SuperView 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒包含
SuperView 488 Caspase-3 底 物 和 Ac-DEVD-CHO
Caspase-3/7 抑制剂。 SuperView 488 Caspase-3 Substrate 为基
于 Caspase-3/7 活力检测细胞凋亡提供了有效的工具，适用
于荧光显微术和流式细胞术。
相比其他基于（FLICA）分析的 Caspase 的荧光底物或
荧 光 抑 制 剂 ， SuperView 488 Caspase-3 Substrate 检 测
Caspase-3/7 活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。
Substrate 由耦合 Caspase-3/7 DEVD 识别序列的荧光 DNA
染料组成。Substrate 最初无荧光，穿过细胞膜进入细胞质。
在凋亡细胞中，Caspase-3/7 剪切 Substrate，释放高亲和性
的 DNA 染色，这种染料迁移到细胞核标记 DNA 并发出明
亮的绿色荧光。因此，SuperView 488 Caspase-3 Substrate 是
双功能的，既可以检测 Caspase-3/7 活性，又可视化细胞核
在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView 488 染色可以
甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。
使用方法
1. 实验优化
下面提供的实验步骤根据终点法检测制度。SuperView
488 Substrate 也可以进行细胞长时间孵育课程研究（见下一
页常见问题）。细胞密度、底物浓度和抑制剂浓度可能需要
优化。 底物浓度可能在 1-10 μM 之间。细胞可以在培养
基、PBS或其他您所选择的缓冲液中孵育底物。对于贴壁细
胞，我们建议更换新鲜含有底物的培养基，以防背景的不均
一性。底物孵育后换液或洗涤细胞的操作是自由选择的。
2. 对照
我们建议您设定以下对照：
A. 阴性对照：不诱导凋亡的细胞
B. 阳性对照：诱导凋亡的细胞
C. 抑制剂对照：诱导细胞凋亡同时（或提前 10-30 min）孵
育Caspase-3/7抑制剂， 再添加SuperView 488 Caspase-3
底物。
3. Ac-DEVD-CHO Caspase-3 抑制剂对照
试剂盒中的 Caspase-3/7抑制剂 Ac-DEVD-CHO 可以用
来确认 Caspase-3/7 依赖于 Superview 488 的荧光信号。 对于
抑制剂对照，抑制剂的终浓度应该至少是底物浓度的 2 倍
（例如当使用 5 μM SuperView 488 底物时，Ac-DEVD-CHO
浓度为10 μM）。添加底物前在室温下孵育 Ac-DEVD-CHO
15-30 min，加入底物后，孵育液中继续保留抑制剂。


本产品仅用于科研
Ac-DEVD-CHO 是可逆的竞争性抑制剂。在某些细胞
类型， 有效的 Caspase-3/7抑制剂需要使用不可逆的抑制剂，
如 Z-DEVD-FMK，或需要在凋亡诱导之前或诱导过程中添
加抑制剂。
4. 流式细胞术
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。
（2）贴壁细胞，执行 SuperView 488 Caspase-3 实验前先用
胰蛋白酶或其他方法消化细胞。
（3）用培养基或缓冲液重悬细胞，使细胞密度为 106
个/mL
（4）吸取 0.2 mL 细胞悬液至流式细胞试管。
（5）抑制剂对照样本，用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞（见上
文）。
（6）200 μL细胞悬液中加入 5 μL 0.2 mM 的 Substrate 并立
即混匀使底物浓度为 5 μM。不同细胞的 底物浓度可能
不同，需分析优化。
（7）室温避光孵育细胞 15-30 min。
（8）加入 300 μL 培养基或 PBS，流式细胞仪分析。检测
绿色荧光的通道（激发/发射：485/515 nm）。
5. 荧光显微术
（1）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。
（2）抑制剂对照样本，用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞（见上
文）。
（3）用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进
行换液（见试验优化）。对于抑制剂对照组，抑制剂与底物
一同孵育。
（4）室温下孵育细胞 30 min 或更长时间。
6. 荧光酶标仪
（1）贴壁细胞生长在黑色 96孔板中；悬浮细胞，调整密至
106
个/mL，0.2 mL 细胞悬液分装到一孔。
（2）选择合适的方法诱导细胞凋亡，未经处理的细胞样本
作为对照。 注意： 细胞可能在管或瓶中处理， 然后转移到 96
孔检测板。
（3）抑制剂对照样本，用 Ac-DEVD-CHO 处理细胞（见上
文）。
（4）对于悬浮细胞，直接添加 Substrate 混匀。对于贴壁细
胞， 用含有 5 μM Substrate 的新鲜培养基或 PBS 对细胞进行
换液（见试验优化）。对于抑制剂对照组，抑制剂与底物一
同孵育。
（5）细胞可以在含有 Substrate 的培养基中直接观察。对于
终点分析法，PBS 清洗细胞，荧光显微镜观察细胞，使用观
察绿色荧光的滤片（激发/发射：485/515 nm）。
（6）对于悬浮细胞，轻轻摇晃重悬细胞。荧光酶标仪设置
激发波长 488 nm和发射波长520 nm。建议贴壁细胞使用底
部阅读方式建议贴壁细胞。 贴壁细胞密度的变化可能导致不
准确的读数。
注意事项
1. 细胞可以用终浓度为 1 μM 的 Hoechst 33342 染料共同染
色，使细胞核产生蓝色荧光染色（激发/发射：346/460 nm）。
2. SuperView 488 染色可以被甲醛固定，但与甲醇固定不兼
容。
3. 甲醛固定的 SuperView 488 染色细胞可以用 0.1%
TritonX-100 处理后进行后续染色，但这样处理后的染色的
亮度可能会减弱
SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒