FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒产品说明书
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
产品货号:XK6012S
产品规格:10T, 50T, 100T
产品内容:
组分 规格 F6012S(10T) F6012M(50T) F6012L(100T)
A. 1×Annexin V 结合缓冲液 10 mL 50 mL 50 mL×2
B. FITC-Annexin V 50 μL 250 μL 500 μL
C. PI 100 μL 500 μL 1 mL
储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。
光谱特性
FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)
产品介绍
FITC-Annexin V/PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的
方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死细胞(红色)
检测细胞凋亡水平。 产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检
测设备进行检测。
FITC-Annexin V可以标记凋亡细胞。Annexin V选择性
结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine, 简称PS)。在细胞
发生早期凋亡时,磷酯酰丝氨酸会外翻到细胞表面,即细胞
膜外侧。用绿色荧光探针FITC标记的Annexin V,即
FITC-Annexin V,可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸,从而检测
细胞凋亡。
碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI) 是一种 DNA 结合染料,
它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞
的细胞核。PI 可以由 488、532 或 546 nm 的激光激发,呈
现红色荧光。
使用方法
下列实验方案以星形孢菌素诱导Jurkat细胞凋亡为例。
如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需调整。
1.流式细胞仪检测
(1)根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经
处理的细胞样品,作为阴性对照;一组样品做单染,用于调
节补偿。
(2)收集细胞。悬浮细胞:300 g,4℃离心5 min收集细胞;
贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后300 g,4℃离心5 min
收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。
注:细胞用胰蛋白酶消化后,在 培养条件和培养基中恢
复约30 min后染色,避免假阳性。
(3)用预冷的PBS洗涤细胞两次,300 g,4℃下离心5 min,
收集1-5×105
个细胞并用100 μL 1×结合缓冲液重悬细胞。
(4)每管加入4-5 μL的FITC-Annexin V和5 μL的PI工作液。
注:我们推荐准备两管额外的细胞,每管只加入一种单染染
料(FITC-Annexin V 和 PI),用于流式单染的补偿调节。
(5)室温避光孵育10-15 min,为降低细胞凋亡进程,孵育
过程可在冰上操作。
(6)每管加入400 μL的PBS或1×结合缓冲液重悬细胞(PBS
或1×结合缓冲液的选择根据不同凋亡处理以及不同细胞具
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒